梯度实验常见的问题与解决方案

点击次数：1522 发布时间：2019-09-18

梯度实验常见的问题与解决方案

*，做HPLC分析时梯度系统可以在缩短分析时间的同时而不影响样品的分离，但是简便的同时也伴随着多种多样的问题，就笔者个人总结，常见的问题有三点：

（1）两相混合后产生气泡

缓冲盐溶液与纯甲醇走梯度产生的气泡图，对此我们公司通常的解决方法是使用“反压调节器”使紫外检测池有一定的压力，阻止气泡形成。其次通常我们不建议使用纯的有机相如纯甲醇，纯乙腈作流动相。

（2）梯度基线漂移问题

此问题一般发生在梯度线形变化的时候，而在低波长下基本不可避免。因为色谱常用的甲醇和乙腈在低波长（如210nm）下是有吸收的，如果基线随着有机相不断增多而上漂或者随着有机相的不断减少而下漂，这不仅是正常现象，还反映了系统的灵敏性和性。所以这个问题无法消除，只能通过选择更的有机溶剂来降低基线漂移的程度，如乙腈的工业污染物为丙酮（有的紫外吸收），选择更的乙腈可以地降低梯度漂移的程度。

（3）梯度鬼峰

这个问题可以一分为二，梯度鬼峰有偶然情况和必然情况两种。

偶然情况为流动相未经良好脱气，溶解氧能与某些有机溶剂形成有紫外吸收的络合物，而出现的吸收，此种情况没有重复性，可以通过良好的流动相脱气而避免。

可能还有些问题这里未能总结，得通过化学工作者不断去发现和总结，遇到问题解决问题是化学工作者的基本工作，实事求是是化学工作的基本要求。

必然情况即随着梯度运行形成一些莫名其妙的峰，并且有*的重复性，不可避免，一般发生在梯度有大的变化的时候。遇到这样的情况不要担心，做一个梯度空白对照，只要梯度鬼峰不影响样品的出峰即可。

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