HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题

    柱前衍生被测组分通过衍生化反应，转化为衍生化产物，然后再经过色谱柱进行分离。液相色谱法中柱前衍生的目的是:通过衍生化反应，使原来不能直接被检测的组分转化为能被所用检测器检测的物质;使被测组分与衍生化试剂有选择地参加反应，而与样品中的其他组分分离;改变被测组分在色谱柱的出峰次序，使之更有利于分离。柱前衍生的点是可以不必严格限制衍生化反应条件，可以允许较长的反应时间及使用各种形式的反应器。其缺点是当一个复杂组分样品经过衍生化反应后，有可能产生多种衍生化产物，给色谱分离带来困难。

    柱后衍生利用衍生反应使被测物与相应的试剂反应，以改变其物理或化学性质，使其被检测到。例如将发色基团或荧光基团键合到样品中去，多放大检测灵敏度，柱后衍生系统开创了柱后衍生系统性能、价格及外形的标准。

    HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题？1）为什么要衍生？2）衍生化的分类？3）进行衍生，适用的化合物有哪些？4）进行衍生化的要求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的缺点？

    答：色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用的化学试剂（一般称为衍生化试剂或标记试剂）使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为：

    1．将紫外—可见吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物，以提检测灵敏度；

    2．提对分析样品的分离和选择性。

    从是否与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线（on line）与离线（Off line）两种。从发生衍生化的场合，分为柱前衍生法（pre-columnderivatization）与柱后衍生法（post-columnderivatization）两种。

    目前，在HPLC中，以离线的柱前衍生法（简称柱前衍生法）与在线的柱后衍生法（简称柱后衍生法）使用居多。